Bu uygulamada, süt ürünlerinde melamin tespiti için üç farklı
LC metodu geliştirilmiştir. İlk metot, ABD FDA metodunun bir modifikasyonudur.
Melaminin rutin miktar tayini için ters faz iyon çifti modunda çalıştırılmak
üzere, bir Agilent LC sistemi (1120 veya 1200) bir ZORBAX SB-C8 LC kolon ile
birlikte kullanılmıştır. İkinci metot, melamin analizini Hızlı Çözünürlüklü
Yüksek Hacim (RRHT) kolonu ile üç katı daha hızlı bir sürede gerçekleştirmek
üzere bir Agilent Rapid Resolution LC (RRLC) kullanılarak yüksek hacim elde
etmeyi hedeflemektedir. Üçüncü metot ise iyon çifti ayıracı olmadan basit bir
tamponlu su / asetonitril mobil fazı kullanılarak melamini başarılı bir şekilde
tutmak için bir ZORBAX 300SCX kolonunun kullanıldığı alternatif iyon değişimli
LC metodudur.
Süt ürünleri matrislerinin karmaşıklığı nedeniyle, yukarıdaki
metotlar için bir temizleme adımı kullanan katı halde ekstraksiyon (SPE)
gereklidir. Kombine ters faz ve güçlü katyon değişim özelliklerine sahip bir
karışık mod polimer SPE kartuşu olan Agilent SampliQ SCX, matris parazitlerinin
başarılı bir şekilde ortadan kaldırılması için kullanılmıştır. Mart 2007'de,
melamin bulaşmış ithal evcil hayvan mamaları, Amerika Birleşik Devletleri'nde
köpekler ve kedilerde böbrek yetmezliğine neden olmuştur. Söz konusu bileşen
haberlerde süt ve süt ürünlerinde bir yasadışı katkı maddesi olarak belirtilmiştir.
Aynı kontaminant, Çin'den ithal edilen diğer sütlü gıda ürünlerinde de tespit
edilmiştir ve küresel olarak endişelerin artması nedeniyle melamin için kapsamlı
bir test yapılmıştır. Yayınlanan analitik yaklaşımlar arasında LC, LC/MS ve
GC/MS bulunmaktadır. LC metodu, melaminin miktar tayini analizinde kullanılmaktadır.
Bu küçük polar bileşenin sıvı kromatografik separasyonu, ters
faz iyon çiftli sıvı kromatografi ile elde edilebilir. ABD FDA, 2007 yılında
hayvan mamalarında bu metodolojiyi geliştirmiştir. Mobil fazın oranında küçük
bir değişiklik ile metot, çeşitli süt ürünleri matrislerinden melamini ayırmak
için başarılı bir şekilde kullanılabilir. Konvansiyonel HPLC'nin dezavantajı süre
ve solvent tüketimidir. Agilent 1200 Serisi Rapid Resolution LC sistemi, çözünürlük
kaybı olmadan veya Agilent ZORBAX RRHT kolonlarının kombinasyonuyla daha iyi
bir çözünürlükle en yüksek hacim için tasarlanmıştır. Bu uygulama notunda,
konvansiyonel HPLC metodu bir 4.6 mm x 250 mm, 5 μm ZORBAX SB-C8 kolonundan denk
sonuçlara sahip bir 4.6 mm x 50 mm, 1.8 μm ZORBAX SB-C8 kolonuna aktarılmaktadır
ve LC çalışma süresi, neredeyse 20 dakikadan 6 dakikaya kısaltılmıştır. Bu
küçük polar bileşenin sıvı kromatografik separasyonuna alternatif bir yaklaşım
da iyon değişimli kromatografidir.
Agilent ZORBAX 300SCX, katyon değişimli yüksek performanslı
sıvı kromatografi için kullanılan iyon olarak bağlı faz kolon paketlemesidir.
Bu paketleme ZORBAX gözenekli silikaya kovalent olarak bağlı bir aromatik
sülfonik asit parçasından oluşmaktadır. Bu kolon, iyon çifti ayracı olmadan
basit bir tamponlu su / asetonitril mobil fazı kullanılarak melamini başarılı
bir şekilde tutmak üzere uygulanmaktadır. Karmaşık süt ürünleri matrisleri için,
LC enjeksiyonu öncesinde protein, şeker ve yağ gibi parazitleri ortadan kaldırmak
gerekmektedir. Katı halli ekstraksiyon (SPE), karmaşık matris özütünü
temizlemenin basit bir yoludur. SampliQ, çok çeşitli sorbent kimyasalları ile
Agilent'in yeni SPE kartuş ailesidir. Bu aile içerisinde, karışık modlu SampliQ
Güçlü Katyon Değişimi (SCX) kartuşu, hem iyon değişimi, hem de ters faz tutma
özellikleri ile bir sülfonik asit - modifiye edilmiş divinil benzen polimerdir.
Bu özellik SampliQ SCX'i, solvent ekstraksiyonu sonrasında temizlik için son
derece etkili kılar. Bu uygulama notunda üç yaklaşım anlatılmıştır; birincisi,
bir SB-C8 kolonu ile Agilent 1120 Compact LC veya 1200 HPLC kullanan bir ters
faz iyon çiftli LC metodudur. İkincisi ise ZORBAX RRHT SB-C8 kolonuyla Agilent 1200
RRLC kullanarak LC çalışma süresini 20 dakikadan 6 dakikaya düşüren bir yüksek
hacim metodudur.
Sonuncusu, Agilent ZORBAX 300SCX kullanan bir IEC metodudur.
Her biri melamini matris parazitlerinden başarılı bir şekilde ayırmakta ve
tutma süresi ve miktar tayini sonuçlarına göre tanımlama sağlamaktadır. SampliQ
SCX SPE kartuşlarıyla numune temizleme ve üç separasyon yöntemi başta olmak
üzere bu çalışmanın sonuçları, süt ürünlerinde melaminin tespiti için Agilent
tarafından eksiksiz bir çözüm sağlandığını göstermektedir. Ters faz iyon çifti
metodu, FDA ve Çin ulusal standartlarına dayanmaktadır. Bununla birlikte, IEC metodu
ise basit, hızlı, hassas ve sağlamdır. Bu metotla, iyon çifti ayracı olmadan basit
bir mobil faz kullanılarak melamin başarılı bir şekilde tutulmaktadır. Daha
fazla bilgi için lütfen www.semlab.com.tr adresini ziyaret ediniz ve konunun
uzmanı Timur Karadağ timur.karadag@semlab.com.tr ile irtibata geçiniz.